Luria Bertani Broth, Lennox 100g

Luria Bertani Broth, Lennox 100g

Luria Bertani Broth, Lennox 100g

Αναφέρεται επίσης ως Lysogeny Broth (LB) είναι ένα διατροφικά πλούσιο μέσο που χρησιμοποιείται κυρίως για την ανάπτυξη βακτηρίων. Ο δημιουργός του, Giuseppe Bertani, σκόπευε το LB να σημαίνει ζωμός λυσογένεσης, αλλά το LB έχει επίσης καταλήξει στην καθομιλουμένη να σημαίνει ζωμός Luria, ζωμός Lennox, ζωμός ζωής ή μέσο Luria–Bertani. Ο τύπος του μέσου LB δημοσιεύτηκε το 1951 στην πρώτη εργασία του Bertani για τη λυσογένεση. Σε αυτό το άρθρο περιέγραψε το τροποποιημένο πείραμα μιας ριπής και την απομόνωση των φάγων P1, P2 και P3. Είχε αναπτύξει το μέσο LB για τη βελτιστοποίηση της ανάπτυξης και του σχηματισμού πλάκας Shigella.

Τα σκευάσματα μέσων LB ήταν ένα βιομηχανικό πρότυπο για την καλλιέργεια της Escherichia coli από τη δεκαετία του 1950. Αυτά τα μέσα έχουν χρησιμοποιηθεί ευρέως σε εφαρμογές μοριακής μικροβιολογίας για την παρασκευή πλασμιδικού DNA και ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών. Συνεχίζει να είναι ένα από τα πιο κοινά μέσα που χρησιμοποιούνται για τη διατήρηση και την καλλιέργεια εργαστηριακών ανασυνδυασμένων στελεχών Escherichia coli. Ωστόσο, για φυσιολογικές μελέτες, η χρήση του μέσου LB πρέπει να αποθαρρύνεται.

Υπάρχουν πολλές κοινές συνθέσεις του LB. Αν και είναι διαφορετικά, γενικά μοιράζονται μια κάπως παρόμοια σύνθεση συστατικών που χρησιμοποιούνται για την προώθηση της ανάπτυξης, συμπεριλαμβανομένων των εξής:

Πεπτίδια και καζεϊνικές πεπτόνες
Βιταμίνες (συμπεριλαμβανομένων των βιταμινών Β)
Ιχνοστοιχεία (π.χ. άζωτο, θείο, μαγνήσιο)
Μεταλλικά στοιχεία

Τα ιόντα νατρίου για τη μεταφορά και την οσμωτική ισορροπία παρέχονται από το χλωριούχο νάτριο. Η τρυπτόνη χρησιμοποιείται για την παροχή βασικών αμινοξέων όπως πεπτίδια και πεπτόνες στα αναπτυσσόμενα βακτήρια, ενώ το εκχύλισμα ζύμης χρησιμοποιείται για την παροχή πληθώρας οργανικών ενώσεων βοηθών για την ανάπτυξη βακτηρίων. Αυτές οι ενώσεις περιλαμβάνουν βιταμίνες και ορισμένα ιχνοστοιχεία.

Στην αρχική του εργασία του 1951, ο Bertani χρησιμοποίησε 10 γραμμάρια NaCl και 1 γραμμάριο γλυκόζης ανά 1 λίτρο διαλύματος. Ο Luria στο “L broth” του 1957 αντέγραψε ακριβώς την αρχική συνταγή του Bertani.Οι συνταγές που δημοσιεύτηκαν αργότερα συνήθως έχουν αφήσει έξω τη γλυκόζη.

Ονοματολογία

Οι συνθέσεις γενικά διαφέρουν στην ποσότητα χλωριούχου νατρίου, παρέχοντας έτσι την επιλογή των κατάλληλων οσμωτικών συνθηκών για το συγκεκριμένο βακτηριακό στέλεχος και τις επιθυμητές συνθήκες καλλιέργειας. Τα σκευάσματα χαμηλής περιεκτικότητας σε αλάτι, Lennox και Luria, είναι ιδανικά για καλλιέργειες που απαιτούν ευαίσθητα στο αλάτι αντιβιοτικά.

LB-Miller (10 g/L NaCl)
LB-Lennox (5 g/L NaCl)
LB-Luria (0,5 g/L NaCl)

Προετοιμασία

LB μέσο

Η παρακάτω είναι μια κοινή μέθοδος για την παρασκευή 1 λίτρου LB:

Μετρήστε τα ακόλουθα:
10 γραμμάρια τρυπόνης
5 g εκχύλισμα μαγιάς
10 ή 5 ή 0,5 g NaCl όπως απαιτείται (δείτε τους τύπους παραπάνω· ορισμένα βακτήρια είναι ευαίσθητα στο NaCl)
Εναιωρήστε τα στερεά σε ~800 ml απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού.
Προσθέστε επιπλέον απεσταγμένο νερό ή απιονισμένο νερό, σε έναν κύλινδρο μέτρησης για να διασφαλίσετε την ακρίβεια, για να κάνετε συνολικά 1 λίτρο.
Σε αυτόκαυστο στους 121 °C για 20 λεπτά.
Μετά την ψύξη, περιστρέψτε τη φιάλη για να διασφαλίσετε την ανάμειξη και το LB είναι έτοιμο για χρήση.

Προσαρμόζοντας το pH

Πριν από το αυτόκαυστο, ορισμένα εργαστήρια προσαρμόζουν το pH του LB σε 7,5 ή 8 με υδροξείδιο του νατρίου. Ωστόσο, το υδροξείδιο του νατρίου δεν παρέχει καμία ρυθμιστική ικανότητα στα μέσα, και αυτό έχει ως αποτέλεσμα γρήγορες αλλαγές στο pH κατά την καλλιέργεια βακτηρίων. Για να ξεπεραστεί αυτό, ορισμένα εργαστήρια προτιμούν να προσαρμόζουν το pH με ρυθμιστικό διάλυμα 5-10 mmol/L TRIS, αραιωμένο από 1 mol/L ζωμό TRIS στο επιθυμητό pH. Ωστόσο, δεν είναι απολύτως απαραίτητο να ρυθμίσετε το pH για τις περισσότερες περιπτώσεις. Μερικά εργαστήρια προσαρμόζουν το pH στο 7,0 απλώς ως προληπτικό μέτρο.

Δεδομένου ότι η ρυθμιστική ρύθμιση με TRIS θα είναι επίσης σε μεγάλο βαθμό αναποτελεσματική έναντι της σημαντικής βακτηριακής ανάπτυξης, η προσαρμογή του pH του LB με αυτόν τον συγκεκριμένο τρόπο είναι συνήθως περιττή. Ως εκ τούτου, η χρήση του TRIS σε ορισμένες συνταγές ζωμού (ειδικά όταν η καλλιέργεια θα αποθηκευτεί σε συνθήκες θερμοκρασίας δωματίου για παρατεταμένες χρονικές περιόδους) μπορεί να θεωρηθεί προληπτική διαδικασία χωρίς μεγάλη επιστημονική αξία.